基因工程至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体；作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点；②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。

A、由“腺苷酸脱氨酶基因通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶”可推出每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒，但不一定含有多个重组质粒，A正确；

B、基因工程中质粒作为运载体，条件之一是含有多个限制酶切点，B正确；

C、每个限制性核酸内切酶识别位点不一定能插入一个ada，还要看限制酶切割后的黏性末端是否与目的基因的黏性末端相同，C错误；

D、题中提出腺苷酸脱氨酶得到成功表达，因此每个大肠杆菌的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子，D正确。

故选C。